單側(cè)腎靜脈結(jié)扎法腎小管間質(zhì)纖維化模型

(1)復(fù)制方法  體重200～250g大鼠，經(jīng)腹腔按0.1ml/kg體重的劑量注射8.5％水合氯醛麻醉，動(dòng)物行仰臥固定，常規(guī)消毒腹部皮膚并取毛；沿腹中線作手術(shù)切口，依次切開皮膚和肌肉，游離左側(cè)腎臟，分離左腎靜脈，用4-0號(hào)手術(shù)縫線結(jié)扎，然后常規(guī)縫合肌肉和皮膚，關(guān)閉腹腔。術(shù)后動(dòng)物常規(guī)單籠飼養(yǎng)觀察，自由飲水及進(jìn)食。于術(shù)后第5、10、15、20及25日動(dòng)物麻醉后右股動(dòng)脈放血處死，分離血清作血肌酐(SCr)含量測(cè)定；處死前1d在禁食不禁水的條件下，收集大鼠24h尿液測(cè)尿規(guī)。取左腎組織標(biāo)本經(jīng)10％甲醛固定后，作常規(guī)組織切片，光鏡下觀察。

(2)模型特點(diǎn)  術(shù)后第5日，模型動(dòng)物出現(xiàn)微量鏡下血尿(紅細(xì)胞5～10個(gè)/HPF)及微量蛋白尿(+)。隨時(shí)間延長(zhǎng)，尿常規(guī)恢復(fù)正常。SCr含量自始至終未見異常。術(shù)后第5日，外觀左腎呈紫紅色，明顯腫脹；隨著時(shí)間延長(zhǎng)(第10、15、20、25日)，左腎逐漸呈灰紅色至灰白色，體積縮小，質(zhì)地變硬；右腎體積略增，但無(wú)其他異常。鏡下病理組織學(xué)觀察顯示，術(shù)后第5日，模型動(dòng)物腎小球淤血，腎間質(zhì)彌漫性淤血、水腫及灶狀出血，腎小管擴(kuò)張，管腔內(nèi)可見管型；術(shù)后第14日，腎小球淤血、基底膜皺縮，腎小管上皮細(xì)胞彌漫性變性、萎縮、管腔擴(kuò)張，腎間質(zhì)淤血、水腫減輕，可見大量淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)。術(shù)后第15～25日，與第10日的病變相似。腎小球發(fā)生缺血性改變，腎小管顯著萎縮，甚至出現(xiàn)腎小管消失，腎間質(zhì)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞灶狀浸潤(rùn)伴明顯纖維化。右腎組織形態(tài)未見明顯組織學(xué)變化。模型制作方法簡(jiǎn)便，成本低廉，造模周期短，成功率高，病變穩(wěn)定。

(3)比較醫(yī)學(xué)  以往的研究表明，各種原因?qū)е碌穆阅I功能衰竭(CRF)與腎小管間質(zhì)纖維化(tubulointerstitial fibrosis, TIF)的關(guān)系，較CRF與腎小球損傷的關(guān)系更為密切。有關(guān)腎小管間質(zhì)纖維化(TIF)的研究已成為近年來腎臟疾病研究關(guān)注的熱點(diǎn)。TIF是臨床上多種慢性非腫瘤性腎臟疾病長(zhǎng)期遷延，終導(dǎo)致患者出現(xiàn)CRF的主要病理基礎(chǔ)。它以腎小管損傷、腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化為特征。由于患者發(fā)生腎間質(zhì)纖維化的臨床病程漫長(zhǎng)，且病因復(fù)雜，再加上取材的局限性，對(duì)TIF病理過程進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究比較困難。建立符合臨床TIF實(shí)際且典型而穩(wěn)定的動(dòng)物模型，對(duì)深入研究腎小管間質(zhì)纖維化的病理生理機(jī)制意義重大。目前常用包括藥物誘導(dǎo)、免疫介導(dǎo)、腎次全切除、單側(cè)輸尿管結(jié)扎、放射損傷、感染、慶大霉素、腺嘌呤等多種方法來制備 TIF動(dòng)物模型，但這些模型均有各自的局限性。其中藥物誘導(dǎo)如環(huán)孢菌素腎炎、阿霉素腎炎等方法，雖然操作簡(jiǎn)單且成功率高，但成本高、實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)、間質(zhì)變化較輕。腎全切除可以造成TIF病變，但操作復(fù)雜，對(duì)動(dòng)物創(chuàng)傷較大。免疫介導(dǎo)的腎炎模型通過延長(zhǎng)致病周期雖然可以得到TIF病變，但難以獲得穩(wěn)定的結(jié)果。腺嘌呤致纖維化模型病變穩(wěn)定，但是需要每天按照動(dòng)物的體重配藥灌胃，操作繁瑣，周期也較長(zhǎng)。慶大霉素腎小管損傷模型以腎小管上皮急性壞死再生為主，間質(zhì)纖維化不明顯。單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型通過尿液潴留壓迫損傷腎組織導(dǎo)致間質(zhì)纖維化，時(shí)間一般控制在15d左右，如果延長(zhǎng)時(shí)間，腎實(shí)質(zhì)受擠壓變的過薄，但是第15日時(shí)，間質(zhì)纖維化病變不很明顯。采用腎靜脈單側(cè)結(jié)扎方法建立的大鼠TIF模型，屬于腎缺血導(dǎo)致的腎小管損傷和腎間質(zhì)增生，其腎臟產(chǎn)生的病變與臨床上人TIF的病變極為相似，對(duì)探討TIF的發(fā)病機(jī)制研究具有較好的應(yīng)用價(jià)值。